新品 | 人CD14分选磁珠（阳选）(51-01-0004)
日期：2025-12-03 阅读：
产品描述
分选原理
首先，用 CD14 磁珠对 CD14+ 细胞进行磁性标记。然后，将细胞悬浮液装入置于分选器磁场的柱中。磁性标记的 CD14+ 细胞被保留在柱中，未标记的细胞贯穿其中。将柱从磁场中移出后，磁性保留的 CD14+ 细胞可作为正选细胞部分被洗脱出来。
背景信息
CD14磁珠可用于从脐带血或PBMC以及胸膜、腹膜或滑膜液、脾脏和淋巴结等各种组织中阳性分选或去除人单核细胞和巨噬细胞。CD14 抗原属于 LPS 受体复合物。由于 CD14 缺乏胞浆结构域，因此抗体与 CD14 结合不会触发信号转导。CD14 在大多数单核细胞和巨噬细胞上强表达，在中性粒细胞和一些髓系树突状细胞上弱表达。
使用方法
● 缓冲液： 配制含有 pH 7.2 PBS、0.5% 牛血清白蛋白（BSA）和 2 mM EDTA 的溶液。将缓冲液置于2-8 °C。使用前对缓冲液进行脱气处理，因为空气气泡可能会堵塞分选柱。
▲ 注：EDTA 可由其他补充剂替代，如抗凝柠檬酸葡萄糖配方- A（ACD-A）或柠檬酸磷酸葡萄糖（CPD）。BSA 可以用其他蛋白质代替，例如人血清白蛋白、人血清或胎牛血清。不建议使用含有 Ca2+ 或 Mg2+ 的缓冲液或培养基。
●分选柱和分离器：CD14阳性细胞可以用xM、xL分选柱富集。强烈表达CD14抗原的细胞也可以用xM、xL分选柱去除。
● (可选) 荧光偶联的CD14抗体用于流式分析。
● (可选) PI或7-AAD可以用于流式分析中排除死细胞。
● (可选) 死细胞清除试剂盒用于死细胞的清除。
● (可选) 预分离过滤器去除细胞团块。
[步骤]
1.样本准备
在处理抗凝外周血或白膜层时，应使用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC）。
▲注:密度梯度分离后除去血小板，将细胞重悬于缓冲液中，在200×g下20°C离心10-15分钟。小心抽吸上清。重复洗涤步骤。
当处理组织或溶血时，使用标准方法制备单细胞悬浮液。
▲注：死细胞可能与磁珠非特异性结合。为了去除死细胞，我们建议使用密度梯度离心或死细胞去除试剂盒。
2.磁珠标记
▲快速工作，保持细胞低温，并使用预冷溶液，可以减少细胞的非特异性标记。
▲下面给出的磁珠标记规模为107个细胞总量。当处理少于107个细胞时，使用与指示相同的体积。当处理较高的细胞数时，相应地扩大所有试剂体积和总体积(例如，对于2×107总细胞，使用所有指示试剂体积和总体积的两倍体积)。
▲ 为了获得佳性能，在磁标记之前获得单细胞悬浮液是很重要的。将细胞通过30 μm尼龙网，去除可能堵塞分选柱的细胞团块。使用前用缓冲液湿润过滤器。
▲ 在冰上工作可能需要增加孵育时间。较高的温度和/或较长的孵育时间可能导致非特异性细胞标记。
1. 细胞计数。
2. 300×g离心10分钟。去除上清。
3. 每107 个细胞总量使用80 μL缓冲液重悬。
4. 每107 个细胞总量添加20 μL CD14磁珠。
5. 混匀，2−8 °C孵育15分钟。
6. (可选) 添加染色抗体，例如：10 μL CD14-FITC 2−8 °C避光孵育5分钟.
7. 每107个细胞加入1 - 2 mL缓冲液洗涤细胞，300×g离心10分钟，去上清。
8. 用500 μL缓冲液重悬多达108个细胞。
▲ 注：细胞数量增多需相应地增加缓冲液的体积。
9. 进行细胞分选步骤。
1.细胞分选
▲根据总细胞数和CD14+细胞数选择合适的分选柱和分离器。
xM或xL分选柱进行细胞分选
1.将分选柱置于相对应的分选器中。
2.用适当体积的缓冲液润洗分选柱：
xM: 500 μL xL: 3 mL
3.将细胞悬液转移至分选柱中。
4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上，没有结合的细胞会顺着液体流下来。加适量的缓冲液，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物，这是未标记的细胞。
xM: 3×500 μL xL: 3×3 mL
5. 将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。
6. 加适量的缓冲液到分选柱中，迅速用塞子推下，得到就是目的细胞。
xM: 1 mL xL: 5 mL
▲ (可选)为了提高CD14+细胞的纯度，洗脱的部分可以在第二个xM或xL柱上富集。用新的分选柱重复步骤1至6中描述的磁分选过程。
储存条件
2-8℃避光保存，请勿冷冻。有效期见试剂外标签。
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