新品 | 人CD34+细胞富集试剂盒（阴选）(91-28-0014)
日期：2025-11-28 阅读：
产品描述
分选原理
根据说明书建议，首先用生物素化的单克隆抗体混合物对细胞进行标记。随后，用链霉亲和素磁珠对细胞进行间接磁性标记。然后将细胞悬液转至流式管，该流式管置于分选器的磁场中。磁性标记的细胞保留在流式管中，而未标记的细胞则倾倒流出，从而实现目的细胞与非目的细胞的分离。
产品信息
使用方法
1.制备人 CBMC 或 PBMC:利用 Ficoll 密度梯度离心法从人脐带血或外周血中分离单个核细胞,以 PBS 洗涤细胞，离心后将 CBMC 或 PBMC 重悬于分选 buffer 中，调整细胞密度为 1x108cells/mL.
注意:分选 buffer为含有2mMEDTA 和 2% 胎牛血清(FBS)的 PBS 或者含有 2mMEDTA 和0.5% BSA 的 PBS，需预先通过 0.22 um 滤膜过滤除菌。
2.将 100μL细胞悬液(1x107个细胞)加入无菌流式管底部，再加入 2 μL 生物素抗体混合物,混匀后 4℃ 孵育 10 min。
注意:将细胞悬液直接加入流式管底部，避免沿流式管管壁加入。根据所使用磁力架不同也可使用离心管进行细胞分选。如果分选更多细胞，则按比例增加生物素抗体混合物的用量。
3.孵育完成后，在流式管中加入20μL清洗过的链霉亲和素磁珠，混匀后 4℃ 孵育 10 min(磁珠使用前需要用分选 buffer 进行清洗:涡旋振荡彻底重悬磁珠，取实验需要的磁珠至 1.5 mL 离心管,加入分选 buffer 至总体积为 1mL，10000g，离心 1min，弃上清。加入1mL 分选 buffer 重悬磁珠，10000 g，离心 1min，弃上清。用与起初相同体积的分选 buffer 重悬磁珠。如取 20μL 磁珠进行清洗，则清洗后用 20 μL 分选 buffer 进行重悬)。
注意:如果分选更多细胞，则按比例增加链霉亲和素磁珠用量。例如分选5X107个细胞，在 500μL细胞悬液中加入10 μL生物素抗体混合物和100μL链霉亲和素磁珠。如果分选少于 1X107个细胞，则将细胞悬液体积补至100μL以，加入2μL生物素抗体混合物和20μL链霉亲和素磁珠。
4.孵育完成后，在流式管中加入 2.5mL 分选 buffer，用移液器吹打 5 次混匀。
5.将含有细胞的流式管置于磁力架上，静置 5 min。
6.将细胞悬液转移至一个无菌离心管中(流式管不要脱离磁力架)，此细胞悬液中即包含富集的人CD34+细胞。300 g，离心5min。弃上清，收集细胞。
注意:可根据实验需要重复步骤 2-6 一次，进一步提高 CD34+细胞的富集效果。
7.根据实验需要洗涤细胞后，将细胞重悬于所需缓冲液或培养基中，即可用于后续分子生物学或细胞生物学实验。
适用范围
本试剂盒适用于从人脐带血单个核细胞(CBMC)或外周血单个核细胞(PBMC)中富集 CD34+细胞。
储存条件
2-8℃避光保存，请勿冷冻。有效期见试剂外标签。
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