新品 | CD3分选磁珠，人，冻干粉(92-01-0138)
日期：2025-10-30 阅读：
产品描述
分选原理
首先，用 CD3 磁珠对 CD3+细胞进行磁性标记。然后，将细胞悬液装入置于分选器磁场的柱中。磁性标记的 CD3+细胞被保留在柱中，未标记的细胞顺着分选柱流出。将柱从磁场中移出后，磁性标记的 CD3+ 细胞可作为正选细胞部分被洗脱出来。
组分
1 瓶 人冻干 CD3 磁珠:与抗人 CD3 单克隆抗体(同种型:小鼠 lgG2a)偶联的微珠。
2 mL 复溶缓冲液
使用方法
试剂和仪器要求
●缓冲液:配制含有pH7.2 PBS、0.5%牛血清白蛋白(BSA)和2mM EDTA的溶液。将缓冲液置于 2-8℃℃。使用前对缓冲液进行脱气处理，因为空气气泡可能会堵塞分选柱。
▲注:EDTA 可由其他补充剂替代，如抗凝柠檬酸葡萄糖配方-A(ACD-A)或柠檬酸磷酸葡萄糖(CPD)。BSA 可以用其他蛋白质代替，例如人血清白蛋白、人血清或胎牛血清。不建议使用含有Ca2+或 Mg2+的缓冲液或培养基。
●分选柱和分离器:CD3 阳性细胞可以用 xM、xL 分选柱富集。强烈表达 CD3 抗原的细胞也可以用xM、xL 分选柱去除。
●(可选)荧光偶联的 CD3 抗体用于流式分析。
●(可选)PI或 7-AAD 可以用于流式分析中排除死细胞。
●(可选)死细胞清除试剂盒用于死细胞的清除。
●(可选)预分离过滤器去除细胞团块。
步骤
一、磁珠复溶
向小瓶中加入所有复溶缓冲液，溶解冻干磁珠。用移液管吹吸混合，直至重新悬浮。溶解后的磁珠在2-8°C下可稳定保存4个月。在小瓶标签上写上复溶后的新有效期。
二、样本准备
在处理抗凝外周血或白膜层时，应使用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC)。
▲注:密度梯度分离后除去血小板，将细胞重悬于缓冲液中，在 200xg 下 20℃℃离心 10-15 分钟。小心抽吸上清。重复洗涤步骤。
当处理组织或溶血时，使用标准方法制备单细胞悬浮液。
▲注:死细胞可能与磁珠非特异性结合。为了去除死细胞，我们建议使用密度梯度离心或死细胞去除试剂盒。
三、磁珠标记
▲快速工作，保持细胞低温，并使用预冷溶液，可以减少细胞的非特异性标记。
▲下面给出的磁珠标记规模为107个细胞总量。当处理少于107个细胞时，使用与指示相同的体积。当处理较高的细胞数时，相应地扩大所有试剂体积和总体积(例如，对于2x107总细胞，使用所有指示试剂体积和总体积的两倍体积)。
▲为了获得佳性能，在磁标记之前获得单细胞悬浮液是很重要的。将细胞通过30 μm 尼龙网，去除可能堵塞分选柱的细胞团块。使用前用缓冲液湿润过滤器。
▲在冰上工作可能需要增加孵育时间。较高的温度和/或较长的孵育时间可能导致非特异性细胞标记。
1. 细胞计数。
2.300xg 离心 10 分钟。去除上清。
3.每 107个细胞总量使用 80 μL 缓冲液重悬。
4.每 107个细胞总量添加 20 μLCD3 磁珠。
5.混匀，2-8℃ 孵育 15 分钟。
6.(可选)添加染色抗体，例如:10 μLCD3-FITC 2-8°℃ 避光孵育5分钟。
7.每 107个细胞加入1-2mL缓冲液洗涤细胞，300xg 离心 10 分钟，去上清。
8.用 500 μL 缓冲液重悬多 108个细胞。
▲注:细胞数量增多需相应地增加缓冲液的体积。
9.进行细胞分选步骤。
四、细胞分选
▲根据总细胞数和 CD3+细胞数选择合适的分选柱和分选器。
▲始终等到分选柱储液器空后再进行下一步操作。
xM 或xL分选柱进行细胞分选
1.将分选柱置于相对应的分选器中。
2.用适当体积的缓冲液润洗分选柱:
xM: 500 μL xL: 3 mL
3.将细胞悬液转移至分选柱中。收集包含未标记细胞的流出液。
4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上，没有结合的细胞会顺着液体流下来。加适量的缓冲液，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物，和第3步的流出液混合。
xM: 3x500 μL xL: 3x3 mL
5.将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。
6.加适量的缓冲液到分选柱中，迅速用塞子推下，得到就是磁性标记的细胞。
xM: 1 mL xL: 5 mL
储存条件
2-8℃避光保存，请勿冻存。有效期见试剂外标签。
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