CD3/CD28分选激活磁珠（91-01-0020）
91-01-0020
产品描述
CD3/CD28分选激活磁珠可用于分选人CD3+T细胞，并提供了一种不需要抗原呈递细胞或抗原就能激活和扩增T细胞的简单方法。通过在磁珠上偶联抗CD3和抗CD28单克隆抗体，提供T细胞激活和扩增需要的初级和协同刺激信号，实现T细胞的分选、激活和扩增。此款磁珠适用于人T细胞、CAR-T等多种T细胞培养技术的应用。
产品信息
货号 | 91-01-0020 | 形状 | 棕色悬浊液体 |
浓度 | 2×108beads/mL | 反应种属 | 人 |
含量 | 1mL | 储存条件 | 2~8℃ |
内毒素 | <0.5EU/mL | 有效期 | 24个月 |
使用方法
1.PBMC 细胞处理:
1.1 将人的 PBMC细胞重悬于含1% HSA的PBS缓冲液中，取样计数并标记CD3进行流式检测。
1.2 根据 PBMC细胞CD3 阳性率,用含1% HSA 的 PBS缓冲液调节CD3+T细胞密度至1X107 cells/mL。
2.CD3/CD28 分选激活磁珠的清洗:
2.1 重悬磁珠(涡旋不低于30s，或者颠倒混匀5min)。
2.2 按照磁珠数和CD3+T细胞孵育比例(推荐比例范围为1:1~3:1。在此推荐范围内，随着磁珠量的增加，CD3+T细胞分选效率会随之提升，细胞的激活及扩增效果也会有所差异。在实际应用中，客户可根据实际情况摸索调整)，取出所需磁珠量，转移到离心管中。
2.3 向上述离心管中加入ImL含1% HSA的PBS缓冲液，将磁珠进行重悬，吹打或涡旋进行润洗。
2.4将上述装有重悬磁珠的离心管放在磁力架(磁珠专用)上，静置1min，弃去上清，注意不要吸取到磁珠。
3.磁珠分选和激活T细胞:
3.1 向上述洗涤后的磁珠中按比例加入调整好CD3+T细胞密度的PBMC，混合均匀。
3.2将上述离心管置于转速15~30rpm的混样仪上，室温孵育30 min。
3.3将上述离心管放在磁力架(磁珠专用)上，静置1min，收集上清并进行计数和流式检测，
3.4用含 200 IU/mL rhIL-2 的完全培养基(客户可根据自身实际实验条件进行调整，根据实验需求明确是否使用自体血浆)重悬磁珠和细胞的混合物，并调整细胞密度为0.8~1.5x106 cells/mL。
3.5 将上述细胞悬液置于细胞培养容器中，于37℃，5%CO2培养箱中培养48h，取样去除磁珠后计数并测试激活效率(CD69+CD25+百分比)。
4.细胞的扩增和培养:
观察细胞状态并定期补液，当细胞密度超过2.5X106cells/mL或培养基变黄时，调整细胞密度至 0.5~1X106 cells/mL。将细胞培养至适宜时长后(一般12-14天)即可收获细胞。
注意事项
1.细胞扩增后需定期轻轻吹打培养容器中的细胞悬液，以便充分分散磁珠和细胞。
2.培养过程中，可以每2~3天进行细胞计数，细胞计数前均需去除磁珠，去除磁珠过程:将细胞培养器中的细胞混悬均匀后取样至离心管中,将其放在磁力架(磁珠专用)上,静置1min，取上清至新的离心管。
3.细胞培养至适宜天数后，需去除磁珠后收获细胞。
4.细胞培养过程中通过流式细胞术对T细胞的纯度、表型、活化状态进行检测。
运输与保存
蓝冰运输，4℃保存。
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